1个载体连3个片段,都是用pcr方式扩增,能扩出正确条带,回收后还对载体DpnI酶切处理了,加入seamless混合酶50℃反应半小时到50分钟左右,转化涂板能长满板,可就是用验证引物菌P验证没一个有条带的,思来想去查了很多就是不知道问题出在哪里了。请求各路大神帮忙解答一下,谢谢了!
1个载体连3个片段,都是用pcr方式扩增,能扩出正确条带,回收后还对载体DpnI酶切处理了,加入seamless混合酶50℃反应半小时到50分钟左右,转化涂板能长满板,可就是用验证引物菌P验证没一个有条带的,思来想去查了很多就是不知道问题出在哪里了。请求各路大神帮忙解答一下,谢谢了!
本文标题:Gibson无缝克隆总是失败
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