生产用细胞基质是指培养病毒时所需要的细胞,是生产病毒疫苗必不可少的原材料。任何微生物的生长、繁殖都有各自的基本的条件,病毒的生长和繁殖必须在细胞内进行。病毒疫苗是以培养、收获足够量的病毒为基础。目前培养病毒的方法主要有二种,一种是通过病毒的细胞培养得到病毒,另一种是采用病毒感染动物(包括鸡胚)获得病毒。
无论细胞类型(如原代细胞,二倍体,干细胞,或者连续传代的细胞)还是所要生产的疫苗类型,细胞基质,必须规范记录,充分表征,并取得相应的资质。
对于所有类型的细胞,根据良好生产规范(GMP)和良好的细胞培养实践(GCCP)的一般原则,制备一个主细胞库(MCB)和工作细胞库(WCB)被认为是较佳实践,以确保可靠的和一致的细胞供应,这些细胞在用于生产前须完全特征化并通过安全性测试。细胞库存储在长期稳定的条件下,如液氮或超低温冰箱,并定期测试,以证明其表型和基因型特征的可持续性。

细胞基质的试验程序依赖于风险评估,考虑到:
(1)细胞基质的来源:物种和组织来源;
(2)细胞基质的历史:分离方法、测试结果或对捐献者的监测表现,传代历史,使用的原材料,动物体内的传代历史;
(3)细胞基质的特点:细胞生长特性,生化,遗传和细胞遗传模型,,以及传染性因素的测试结果;
(4)致瘤性和致癌活性评估。
必须评估细胞基质与疫苗病毒之间的相容性。由于选择压力可以改变细胞培养传代过程中病毒的基因型或更多的表型,必须证明疫苗病毒的稳定性。
如Vero细胞可作为轮状病毒疫苗、流行性乙型脑炎病毒疫苗、流感病毒疫苗等病毒疫苗病毒的基质。Vero细胞被成功的用来培养多种疫苗,在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献,在医药研究种广泛应用。
Vero细胞来源: 非洲绿猴肾细胞
形态:上皮细胞
生长特性:贴壁
注释:该细胞是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。
培养液:MEM( 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸钠),10%胎牛血清。
Vero细胞也可用M199加牛血清培养,M199还有两款改良型SFRE 199-1和SFRE 199-2,近有报道,由HiMedia公司生产SFRE 199培养基系列,可用于Vero细胞的无血清培养[1]。如下图所示,分别用添加水解乳蛋白的F-12和SFRE 199-1培养Vero细胞,结果显示Vero细胞在无血清的SFRE199-1中生长状态良好。

传代:吸去培养液。用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。 加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。(以1:3至1:6为宜,传代期间培养液每周更换2-3次)
冻存: 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
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