APT分享 | 去除高丰度蛋白的技术有哪些？
2017-07-27 15:14
血清、血浆、脑脊液等典型体液是基于质谱平台的蛋白质组学研究领域中的常客。这类样本含有种类丰富的蛋白质，其中高丰度蛋白（high-abundantproteins，HAP）比例达到97%~99%，包括白蛋白、IgG、IgA、纤维蛋白原、转铁蛋白、触珠蛋白、抗胰蛋白酶等。而低丰度蛋白（low-abundantproteins，LAP）才往往是疾病的特异性生物标记或者药物作用的靶蛋白分子，因此在制备样品时，如何去除掉干扰检测的高丰度蛋白，尽可能富集更多低丰度蛋白，成为质谱鉴定数量多少的关键因素之一。
针对这一热点问题，开发的技术也是花样百出。目前常用的技术有亲和技术、沉淀超滤法和色谱技术等，其中亲和技术应用广泛，效果不错。它是通过固定化的配基与靶蛋白质特异性亲和而达到将靶蛋白质从样品中分离或去除的目的。根据配基的不同，介绍以下4种高效的商品化产品。
（1）ProteoExtract™高丰度蛋白去除试剂盒（德国默克公司）
该试剂盒提供的重力自流式纯化柱含亲和树脂混合物（IgG抗体配基），能高效特异性地结合血清白蛋白和IgG，可以去除样品中80%以上的血清白蛋白及IgG。操作简便，交叉污染低，每个柱子吸附量高达2mg白蛋白和0.7mgIgG。
（2）基于IgY多克隆抗体蛋白去除产品（Seppro）
该类产品以抗人血浆HAP的IgY组合抗体为配基，与HAP的亲和力更强，可去除样品中占其整个蛋白质组97% 的14种、20 种甚至50种高丰度蛋白质，去除效率>95%，产品形式多样，包括离心柱、色谱柱、个性定制等，可重复利用。
（3）ProteoMinerTM低丰度蛋白富集系统（伯乐公司）
该试剂盒以组合的文库六肽为配基，可高特异性亲和样品中低丰度的蛋白质，而没有与结合位点结合的那些过量的高丰度蛋白质就会被去除，小容量试剂盒中每个柱子的低丰度蛋白得率达到10mg。该方法重现性好，成本较低。此试剂盒对物种没有要求。想了解原理的童鞋请戳下图观看 ↓↓↓
（4）多重亲和去除系统（安捷伦公司）
该去除高丰度蛋白质的方法是通过高丰度亲和色谱柱的方法进行去除高丰度的方法。该系统由不同规格的亲和色谱柱和优化后的缓冲液组成。
该系统有多款色谱柱可供选择，其中较为常用的就是H14 和M3两种色谱柱，分别可去除人血清血浆样本中高达94%的14种高丰度蛋白质和小鼠血清中的3种高丰度蛋白。其主要原理可以见下图：
高丰度蛋白亲和去除原理
以上是高丰度蛋白质常见的去除方法，大家注意到了吧，不同的方法对物种限制，去除高丰度蛋白质的种类各有不同，效果当然也是不同的啦。一般可能要根据不同的需求或者物种去选择需要的方法进行试验，有需求的盆友们希望这些对你们能有所帮助哦！
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